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    如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率?

    發(fā)布時間: 2021-10-11  點擊次數(shù): 1765次

    提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產(chǎn)生會被細(xì)胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。


    提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些:

    1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上,以大分子作為運載體,能提高轉(zhuǎn)染效率。


    2、測試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測試緩沖效率,找到最適pH值。


    3、使用轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑,如甘油、氯喹、其他可購買的轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑。因為這些試劑對細(xì)胞有一定毒性,因此,應(yīng)針對每種細(xì)胞系通過實驗確定轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑處理的最佳時機(jī)、時長和強(qiáng)度。


    除了這些共通的步驟,不同廠家還會對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動,有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應(yīng)緩慢混合。


    因此,在使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染時,應(yīng)針對不同試劑和細(xì)胞系,耐心調(diào)整實驗參數(shù),才是獲得高轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵。


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