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    Starvio siRNA轉(zhuǎn)染實驗指南--細胞狀態(tài)

    發(fā)布時間: 2023-08-24  點擊次數(shù): 1592次

    RNA轉(zhuǎn)染實驗的影響因素有很多,而細胞狀態(tài)往往是同學(xué)們最容易忽略的一點。如果細胞狀態(tài)差,那么轉(zhuǎn)染時就會出現(xiàn)細胞死亡、轉(zhuǎn)染效率低下等結(jié)果。那么關(guān)于細胞狀態(tài),我們應(yīng)該注意些什么呢?


    一、使用凍存復(fù)蘇后,已傳了兩三代的細胞
    剛剛復(fù)蘇的細胞十分脆弱,稍有不慎就會死亡,因此一切接觸細胞的動作都要盡可能地輕柔。一般而言,細胞在凍存復(fù)蘇后的一兩代之內(nèi)或直到它們?nèi)繌?fù)蘇之前都很難轉(zhuǎn)染。建議在傳代2-3代后再進行實驗,此時的細胞從解凍過程中恢復(fù)過來,并恢復(fù)正常的生長速度,狀態(tài)較為穩(wěn)定。


    二、細胞生長旺盛,形態(tài)正常
    1、通常情況下,細胞在快速增殖時轉(zhuǎn)染效率較高,但在停滯或死亡時轉(zhuǎn)染效率明顯下降,因而進行小核酸轉(zhuǎn)染實驗時,細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期,同時細胞比活性應(yīng)保持在90%以上,這樣才能獲得較好的轉(zhuǎn)染效率。
    2、其次,細胞具有多種多樣的形態(tài),我們在使用細胞時,一定要牢記它本來的形態(tài),如球形、桿狀、星形、多角形、梭形、圓柱形等,這樣才能及時發(fā)現(xiàn)細胞是否已經(jīng)變異,或是培養(yǎng)環(huán)境條件(密度、PH、培養(yǎng)基、微生物污染等)是否影響細胞正常生長。

    三、注意細胞污染問題
    1、細胞污染一般是由于操作不規(guī)范或無菌措施不到位等引起的,如真菌、細菌、支原體、黑膠蟲、病毒、細胞交叉污染等,繼而導(dǎo)致不同程度的細胞退化、活性下降、生長變緩、甚至細胞死亡。
    2、如果發(fā)現(xiàn)細胞污染,須立即停止實驗并及時處理污染源,以免造成更大的影響。切勿急功近利,使用受污染的細胞,否則會造成實驗數(shù)據(jù)的錯誤、影響實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

    以上就是針對于siRNA轉(zhuǎn)染實驗有關(guān)于細胞狀態(tài)需要注意的方面。要知道無論是什么科研,好的實驗材料才能鑄就好的實驗結(jié)果,希望大家可以重視起來,切莫因小失大!





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