考染法蛋白定量試劑盒（蛋白制備）

產品介紹

1. 產品描述：

考馬斯亮藍蛋白定量法又稱Bradford法，是蛋白質快速定量方法之一。考馬斯亮藍（Coomassie brilliant blue G-250）與蛋白質結合后染料的最大吸收峰由465 nm變?yōu)?95 nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樗{色，在595 nm波長下測定的吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相當。反應迅速，2 min達到平衡并在1 h內保持穩(wěn)定。操作簡便，只需要一種反應試劑。干擾物質少，K+、Na+、Mg2+離子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、(NH4)2SO4、乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。本試劑盒采用改良考染法和優(yōu)化的試劑組成以及優(yōu)化的測定方案，可對0.5~2000 µg/mL濃度范圍的蛋白進行線性檢測，顯著提高了蛋白檢測靈敏度。

2. 產品特點：

（1）簡單便捷、靈敏度高；

（2）線性標準曲線范圍為0.5~50、5~500和50~2000 µg/mL；

（3）不受大部分金屬離子或螯合劑影響。

考染法蛋白定量試劑盒（蛋白制備）

使用說明

1. 產品組分：

注：配套5 mg/mL的BSA蛋白標準品，貨號AC0238：-20℃保存，有效期為12個月。

2. 儲運條件：

考馬斯亮藍溶液置于2~8℃保存，有效期12個月，2~8℃運輸；

配套的BSA 蛋白標準品，置于-25~-15℃保存，有效期12個月，干冰運輸。

3. 注意事項：

（1）分別在595 nm和450 nm測定OD值，計算OD594/OD450，以此代替原有的OD595作圖，可明顯提高檢測的精確度和靈敏度約10倍，顯著提高測定的線性關系，并降低去垢劑的影響。在進行超敏感度測定時可考慮此法；

（2）主要干擾物質的終濃度：SDS<0.002%；Triton X-100<0.1%；Tween-20/60/80<0.015%；NaOH<0.1 N；

（3）蛋白-染料結合物在1 h內保持穩(wěn)定，但在5~20 min內穩(wěn)定性最好，因此應盡快測定。如果放置過久將出現沉淀，或使測定結果偏低；

（4）染料不結合精氨酸、賴氨酸及分子量小于3 kDa的短肽，所以不同的蛋白質由于精氨酸和賴氨酸含量不同會出現小范圍的測量偏差；小于3 kDa的短肽純品不能用此方法測定；

（5）蛋白-染料結合物附著在石英比色皿后難以洗去，因此不宜使用石英比色皿?？捎貌ＡЩ蛩芰媳壬螅煤罅⒓从?5%乙醇或洗滌劑浸泡洗滌。塑料比色皿不可用乙醇長時間浸泡；

（6）標準曲線應該每次新做。但每一稀釋度的BSA標準品可預先配好-20℃凍存?zhèn)溆?，注意在使用這種非新鮮配制的BSA時，如果發(fā)現標準曲線的某一些點偏差較大，說明稀釋的BSA已經壞掉應予重配。